Princip metody FISH

Vyšetření aneuploidií, mikrodelecí a strukturálních změn chromozomů metodou FISH

FISH - fluorescenční in situ hybridizace - je standardní cytogenetické vyšetření, které se používá k upřesnění a doplnění chromozomálního vyšetření, eventuálně k ověření nálezu zjištěného běžným cytogenetickým rozborem (karyotypem www.genetikakv.cz/cyto.html). FISH metoda se používá rovněž při preimplantační genetické diagnostice (PGD).

Metoda fluorescenční in situ hybridizace spočívá v navázání specifického řetězce DNA, který na sobě nese flourescenční barvivo (DNA sonda) komplementárně k vyšetřovanému úseku DNA. Při zvýšené teplotě 72-75 °C dojde k rozvolnění vláken DNA sondy i vyšetřovaného vzorku, při následném ochlazení většinou na 37 °C se sonda specificky naváže do vyšetřovaného místa - dochází k hybridizaci. Díky fluorescenčnímu značení sondy se pak ve fluorescenci vyvine barevný signál.

Podle místa na chromozomu, do kterého se sonda váže, rozlišujeme čtyři typy DNA sond:

centromerické - váží se na střední část chromozomu - centromeru, slouží k diagnostice početních chromozomálních změn, detekci chromozomů neznámého původu, umožňují interfázickou FISH na nedělících se buňkách včetně PGD
lokus specifické sondy - vazba probíhá do konkrétního místa genu (lokusu), slouží k vyšetření mikrodelecí (chybění malých částí chromozomů u mikrodelečních syndromů), zjištění amplifikace onkogenů a některých specifických translokací, umožňují interfázickou FISH včetně PGD
subtelomerické - váží se na koncové části chromozomů - telomery
celomalovací sondy - sondy hybridizují s mnohačetnými chromozomovými sekvencemi, nabarví se tak fluorescenčně celý chromozom. Slouží k vyšetření chromozomálních přestaveb a analýze translokací a k detekci původu marker chromozomů (malých nadpočetných chromozomů neznámého původu). Lze je využít pouze na metafázních chromozomech, nikoliv pro interfázickou FISH.

Metodou FISH vyšetřujeme chromozomy, interfázní buněčná jádra nebo blastomery embryií při PGD.

FISH interfázní jádro

FISH metafázních chromozomů

Texty k obrázkům:

Obrázek FISH_interfázní jádro: Jádro bílé krvinky ve fázi mezi 2 děleními s viditelnými chromozomy 18 a X.

Obrázek FISH_metafázní chromozomy: Viditelné metafázní chromozomy s fluorescenčně označenými chromozomy 18 a X u zdravé ženy.

Preimplantační genetická diagnostika - PGD

Cílem preimplantační genetické diagnostiky je zvýšit šanci partnerů na početí a narození zdravého potomka. PGD vyšetření má pomoci párům s dědičnou chromozomální přestavbou předejít časným spontánním potratům a umělému přerušení těhotenství po odhalené nebalancované chromozomální výbavě plodu (při vyšetření plodu v těhotenství).

Vyšetřením jedné nebo dvou buněk (blastomer) odebraných z vyvíjejícího se embrya je tak možné odhalit sledované genetické abnormality - aneuploidii (změna v počtu chromozomů) nebo translokaci (změna rozložení genetické informace v chromozomu) budoucího plodu. Odběr buňky se provádí u tři dny starých embryí vzniklých při IVF (mimotělním oplodnění). V této fázi vývoje tvoří embryo 6-10 buněk, které zatím nejsou specializované a obsahují kompletní genetickou výbavu. Vývoj embrya není šetrným odběrem blastomery nijak ovlivněn.

Při standardním PGD vyšetření se vyšetřují chromozomy 13, 15, 16, 18, 21, 22, X a Y. V případě translokací se spektrum použitých sond sestaví na míru podle již předem známého nálezu translokace u rodičovského páru.

Volba pohlaví embrya se provádí striktně pouze z genetických důvodů u párů, které jsou nosiči genetického onemocnění vázaného na X - pohlavní chromozom (Duchennova/Beckerova muskulární dystrofie, hemofilie), pokud není dostupné cílené PCR vyšetření.

Na základě výsledku preimplantační genetické diagnostiky metodou FISH lze pak k transferu do dělohy vybrat pouze embrya s normálním nálezem.

Výsledek PGD se doporučuje ověřit prenatální diagnostikou, protože chromozomy vyšetřené při PGD nepokrývají zbylé chromozomy v genové výbavě plodu.

PGD ke sledování počtu chromozomů - zdravé embryo mužského pohlaví

Downův syndrom

PGD ke sledování počtu chromozomů - embryo s Downovým syndromem - jsou přítomny tři chromozomy 21

O laboratoři

Pro odbornou veřejnost

Pro pacienty a samoplátce

Součásti institutu

Adresa laboratoře

Institut reprodukční medicíny a genetiky s.r.o.

Laboratoř lékařské genetiky

Bělehradská 14, 36001 Karlovy Vary

Telefony:

Objednání: 353 433 966, 353 433 958

Laboratoř: 353 433 967

Mapa se situováním laboratoře